Spectrometrie de masă (MS)

Spectrometria de masă (MS) este tehnica analitică ce confirmă identitatea moleculară a unei peptide prin măsurarea raportului masă-la-sarcină. În timp ce HPLC măsoară puritatea (cât de mult există dintr-o specie), MS măsoară identitatea (care specie este). Pentru peptide, fluxul de lucru tipic folosește ionizarea prin electrospray (ESI) sau ionizarea prin desorbție laser asistată de matrice (MALDI) pentru a produce ioni moleculari încărcați, care apoi sunt separați și detectați de un analizor de masă (quadrupol, time-of-flight sau orbitrap). Masa monoizotopică observată este comparată cu masa teoretică calculată din secvența peptidei; o potrivire în 1 Da (sau mult mai strictă cu MS de înaltă rezoluție) confirmă identitatea. Traseul MS pe un Certificat de Analiză este al doilea pilon al caracterizării peptidelor, complementând numărul de puritate HPLC. O peptidă poate fi 99% pură HPLC, dar să fie secvența greșită - acest lucru este rar, dar se întâmplă când erorile de sinteză produc o trunchiere sau substituție care se co-elueaza strict. Doar datele MS exclud acest lucru. Pentru peptide cu modificări complexe - fosforilare, biotinilare, etichete fluorescente, ciclizare - se folosește MS tandem (MS/MS) pentru a fragmenta peptida și a citi direct secvența. Acoperirea secvenței din MS/MS este standardul de aur pentru confirmarea identității pentru sinteza nouă sau non-standard. Peptra Labs furnizează caracterizare MS completă cu fiecare lot: masa observată pe COA include diagrama de deconvoluție și o comparație side-by-side cu masa teoretică calculată din secvența de aminoacizi a peptidei. Pentru peptide unde verificarea identității specifice a reziduurilor contează (de ex., o formă fosforilată vs nefosforilată), COA-ul include și modelul de fragmentare MS/MS.