Puritate HPLC

Cromatografia de lichide de înaltă performanță (HPLC) este standardul industrial pentru măsurarea purității peptidelor. Când o peptidă are un procent de puritate HPLC declarat, cifra ar trebui să provină dintr-un sistem HPLC calibrat, folosind de obicei o coloană în fază inversă C18 cu un detector UV la 214 nm sau 220 nm. Fiecare vârf din cromatogramă reprezintă o specie moleculară distinctă; aria de sub vârful țintă, exprimată ca procent din aria totală a vârfurilor, reprezintă cifra de puritate. Pentru peptidele de cercetare, valorile foarte ridicate trebuie examinate împreună cu orice teste suplimentare disponibile pentru lotul respectiv, fără a confunda puritatea cu identitatea moleculară. Alegerea lungimii de undă UV contează: 214 nm captează direct absorbția legăturii peptidice și este setarea cea mai universală pentru peptide; 220 nm este folosit uneori pentru a suprima zgomotul din faza mobilă, dar subestimează absorbanța pentru peptidele fără resturi aromatice. HPLC-ul cu gradient (variația compoziției fazei mobile în timp) separă specii înrudite îndeaproape - secvențe trunchiate, variante oxidate, resturi racemizate - care s-ar co-eluta în condiții izocratice. Raportul complet de puritate pe un Certificat de Analiză trebuie să includă tipul coloanei, faza mobilă, programul gradientului, debitul, lungimea de undă a detecției, timpul de retenție al vârfului țintă și o copie a cromatogramei. Revizuirea tuturor acestor parametri este singura cale de a înțelege ce înseamnă cifra de puritate declarată pentru lotul respectiv. Peptra Labs înregistrează acești parametri în informațiile COA disponibile pentru loturile eligibile.