Reconstituire

Reconstituirea este procesul de dizolvare a unei peptide liofilizate înapoi în soluție pe banca de laborator, pregătită pentru folosire într-un experiment. Realizată corect, păstrează puritatea, identitatea și activitatea biologică a peptidei; realizată neglijent, poate introduce contaminare, degradare parțială sau concentrații inconsistente între experimente replicate. Alegerea solventului depinde de peptidă și de aplicația în aval. Apa sterilă (grad USP) este cea mai simplă alegere pentru reconstituire pe termen scurt și dă o soluție curată, ne-tamponată. Apa bacteriostatică (conținând 0,9% alcool benzilic) inhibă creșterea microbiană și este potrivită pentru flacoane multi-utilizare timp de 1-28 zile la 2-8°C, în funcție de stabilitatea intrinsecă a peptidei. Tampoane specifice - PBS la pH 7,4, acetat la pH 4-5, bicarbonat de amoniu pentru MS în aval - sunt alese când pI-ul peptidei, solubilitatea sau contextul experimental o cer. Unele peptide hidrofobe necesită o dizolvare inițială într-un volum mic de DMSO sau acid acetic înainte de diluare în tamponul de lucru. Volumul de adăugat este calculat pentru a obține concentrația finală dorită: împărțirea masei etichetate de pe flacon la volum dă concentrația. Majoritatea laboratoarelor împart soluția reconstituită în alicote de unică folosință imediat, depozitează alicotele la -20°C sau -80°C și dezgheață o alicotă per experiment pentru a evita degradarea prin îngheț-dezgheț a stocului în vrac. Documentează condițiile de reconstituire în caietul de laborator: solventul, volumul, data, concentrația așteptată și orice observații vizuale (turbiditate, precipitat, culoare). Această documentare este esențială pentru reproductibilitate și este adesea cerută de revizori la raportarea cercetării bazate pe peptide.